液质联用技术的要求及选择

液质联用(HPLC-MS)又叫液相色谱-质谱联用技术，它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。

液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。

流动相的要求

流动相应避免使用非挥发性添加剂、无机酸、金属碱、盐及表面活性剂等试剂。色谱流动相一般选择色谱纯级甲醇、乙腈、异丙醇；水应充分除盐，如超纯水或多次石英器皿重蒸水。流动相的添加剂，如甲酸铵、乙酸铵、甲酸、乙酸、氨水、碳酸氢铵应选择分析纯级以上的试剂，慎用三氟乙酸。挥发性酸、碱的浓度应控制在0.01%～1%(体积比)，盐的浓度好保持在20 mmol/L以下。

试样的要求

所有试样必须过滤，盐浓度高的试样应预先进行脱盐处理。鉴于高浓度和离子化能力很强的试样容易在管道残留形成污染，且难以消除，未知样品分析时应遵循浓度宁稀勿浓、由低到高的规律。采用直接进样方式时，试样溶液的浓度一般不宜高于20μg/mL，若浓度高于100μg/mL时信号值仍偏小，应考虑所用条件、参数、离子检测模式等是否合适，仪器状态是否正常等。混合物试样一般不宜采用直接进样方式分析。

离子源的选择

根据待测样品的性质选择合适的离子源、检测离子的极性和模式及参数。在开机前完成离子源的更换和安装。

流速的选择

应根据离子化方式的不同，选择导人离子源的液体流速，并采用恰当的接口参数辅助流动相挥发，减少对质谱的污染，提高检测灵敏度。尽管电喷雾离子化可在1μL/min～1 mL/min的流速下进行，大气压化学离子化允许的流速可达2mL/min，常规ESI分析的适宜流速为0.l～0.3 rnL/min，APCI为0.2～1.0 mL/min。当色谱分离因采用常规柱而使用较大的流动相流速时，需在色谱柱后对洗脱液分流，仅将一定比例的液体引入离子源分析。

样品分析

在进行样品分析前，应先优化液相色谱条件，实现混合样品的良好分离。

(1)定性分析

单级质谱分析通过进择合适的Scan参数来测定待测物的质谱图。串联质谱分析则选择化合物的准分子离子峰，通过优化质谱参数，进行二级或多级质谱扫描，获得待测物的质谱。高分辨质谱可以通过准确质量测定获得分子离子的元素组成，低分辨质谱信息结合待测化合物的其他分子结构的信息，可以推测出未知待测物的分子结构。

(2)定量分析

采用选择离子检测(STM)或选择反应检测(SRM)、多反应监测(MRM)等方式，通过测定某一特定离子或多个离子的丰度，并与已知标准物质的响应比较，质谱法可以实现高专属性的定量分析。外标法和内标法是质谱常用的定量方法，内标法具有更高的准确度。质谱法所用的内标化合物可以是待测化合物的结构类似物或稳定同位素标记物。

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