液质联用仪使用经验总结

1.做液质，加离子诱导剂得是挥发性的，生物碱用甲酸或乙酸

2.酸性物质适合做负离子检测，所以流动相偏碱性较合适，促使其解离，碱性物质适合做正离子检测，流动相中适当的加入酸，促使其形成正离子，流动相中适当加一些醋酸钠（或者醋酸铵），可形成加钠的正离子或者加铵的正离子。

维护好仪器:

首先流速不能过大，液质是不能承载过大流速的；

其次电压不要加到极限，尤其是正负离子转换时要适当调整；

最后是做完样一定要及时冲洗和吹扫管路。

质谱维护经验交流：做样前－检查氮气，流动相，质谱仪的真空度，毛细管温度…

（1）最好不用直接进样（容易污染离子源）；

（2）做联用时最好分流（a可以使用常规柱，b缩短分析时间，c 延长质量分析器寿命）；

（3）最好使用在线切换阀，降前每个样品的前后1－2分钟的流动相切入废液（避免样品中的盐进入质谱，做Sequence时可以把平衡柱子的流动相切入废液）；

（4）开始联用前，直接运行质谱数分钟，可以先将温度（毛细管温度和离子源温度（APCI））加热到预设定值（如果是APCI源还可以避免将烧掉heater，太贵了，最好别烧）；

（5）待机时将切换阀置于waste，避免刚开液相时将流动相打入离子源；

（6）关机前毛细管的温度先降下来，稳定一段时间后再关闭电源，避免风扇停止转动后毛细管外围的热量向里扩散，容易引起内部线路及电子元器件老化加速；

（7）每天清理毛细管口外部，擦洗干净，每次停机时注意清洗Skimmer，用无尘擦拭纸，kimberly那种；

（8）如果用的是钢瓶而且天天做样的话，将两个钢瓶并联，当然，一月不做一次的话就算了；

（9）做定量时注意离子源喷针的具体位置，否则标准曲线就不能用了；

（10）不要不经过柱子分离进行定量分析，结果不可靠（竞争性抑制目标分子离子化）；

（11）如果是负离子检测的话，可以相流动相中加入少量异丙醇；

（12）不要使用不挥发性盐，如果使用挥发性盐，但浓度不要超过20mmol/l；

（13）需要使用酸的情况下可以用甲酸，乙酸，三氟乙酸可以用，但能用甲酸或乙酸时就别用TFA；

由于液质的流速较小（ESI一般为0.2ml/min），所以配置样品的溶剂强度不能太大，尽量小于起始比例，否则，会出现保留时间偏移等问题；

如果在液相上摸好的条件，注意尤其是流动相的组成要转化成合适LCMS分析的；

磷酸盐及其他不挥发缓冲盐在离子源会沉淀并堵塞毛细管等，要更换成可挥发的有机缓冲盐；

缓冲盐会导致离子抑制，因此要控制缓冲液的强度，<10mM；

去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生， 表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建议超声清洗多次；

E要做好质谱的维护工作，就得从小处着手。比如分析的样品必须要干净，这样既可以保护色谱柱，也可以防止污染质谱；分析了大量的生物样品后，冲洗系统时，先用高比例的水相冲洗，把源也给洗一下，然后再换用高比例的有机相，这时要把柱后管路从源上拿下来，避免柱中的杂质给冲进质谱……细节很多很多，大家在日常应用中尽量注意和避免就可以了。

解析分子离子区

(1) 标出各峰的质荷比数，尤其注意高质荷比区的峰；

(2) 识别分子离子峰。首先在高质荷比区假定分子离子峰，判断该假定分子离子峰与相邻碎片离子峰关系是否合理，然后判断其是否符合氮律。若二者均相符，可认为是分子离子峰；

(3) 分析同位素峰簇的相对强度比及峰与峰间的Dm值，判断化合物是否含有Cl、Br、S、Si等元素及F、P、I等无同位素的元素；

(4) 推导分子式，计算不饱和度。由高分辨质谱仪测得的精确分子量或由同位素峰簇的相对强度计算分子式。若二者均难以实现时，则由分子离子峰丢失的碎片及主要碎片离子推导，或与其它方法配合；

(5) 由分子离子峰的相对强度了解分子结构的信息。分子离子峰的相对强度由分子的结构所决定，结构稳定性大，相对强度就大。对于分子量约200的化合物，若分子离子峰为基峰或强蜂，谱图中碎片离子较少、表明该化合物是高稳定性分子，可能为芳烃或稠环化合物；
例如：萘分子离子峰m／z 128为基峰，蒽醌分子离子峰m／z 208也是基峰；

分子离子峰弱或不出现，化合物可能为多支链烃类、醇类、酸类等；

解析碎片离子

(1) 由特征离子峰及丢失的中性碎片了解可能的结构信息

若质谱图中出现系列CnH2n+1峰，则化合物可能含长链烷基。若出现或部分出现m／z 77，66，65，51，40，39等弱的碎片离子蜂，表明化合物含有苯基。若m／z 91或105为基峰或强峰，表明化合物含有苄基或苯甲酰基。若质谱图中基峰或强峰出现在质荷比的中部，而其它碎片离子峰少，则化合物可能由两部分结构较稳定，其间由容易断裂的弱键相连；

(2) 综合分析以上得到的全部信息，结合分子式及不饱和度，提出化合物的可能结构；

(3) 分析所推导的可能结构的裂解机理，看其是否与质谱图相符，确定其结构，并进一步解释质谱，或与标准谱图比较，或与其它谱(1H NMR、13C NMR、IR)配合，确证结构；

操作注意事项注

1.前处理：样品一定要干净，不管是为了质谱还是为了保护柱子，生物样品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，尽量高转速12000rpm以上，低温离心，最好离2次（保险一点），转移样品也要仔细，从中间慢慢吸，有时会有漂浮物，岛津的质谱好像做直接沉淀的源比较容易堵，Waters的好些；

2.样品浓度：质谱是灵敏度很高的仪器，进样浓度一定不能太高，1－2ug/ml已经可以啦，太高的浓度对仪器来说比较容易造成残留，而且定量也会不准啦；

3.流动相：流动相中尽量加易挥发的盐，尽量不要加表面活性剂之类的，容易离子抑制，如果遇到离子抑制，可以试试把你的样品峰往后推推或者改变提取方法，也可以试试用APCI源。如果你的液相是低压混合的，尽量不要跑梯度，那样很费时间，如果没办法，一针又要走很长时间的话，可以考虑切换，只测样品出峰前后的那段时间，这样可以保护质谱。但是如果你用粗柱子，较高流速的也可以考虑跑梯度，如API4000，但要尽量减小死体积；

4.冲洗：冲柱子自然不用说了，低有机相和高有机相分别冲一定时间（各至少半个小时以上吧），柱子保存在高有机相中。做完试验，冲源也是很重要的，也是低有机相和高有机相冲，但是时间可以不用那么长，你可以先冲源再冲柱子，或者两者分开冲，个人觉得分开冲好些，这样柱子上的脏东西就不会进到源里面去啦。冲源的时候气可以关小些；

举例：岛津20AD/API4000质谱联用仪关机顺序：

1、灭活软件，关闭液相泵，自动进样器及柱温箱电源开关；
       2、关掉质谱仪电源开关，停止真空系统；
       3、机械泵继续工作至少15min以上；
       4、关掉机械泵上的电源开关；

5、关掉氮气发生器及UPS的电源开关，让仪器自然卸真空；

开机顺序

1、打开UPS和氮气发生器开关，待氮气的压力表稳定后，打开机械泵上的电源开关；
       2、机械泵工作至少15min后，打开质谱仪的电源主开关，等系统抽真空24h以上才可以正常操作仪器扫描；初始真空度为7--9；

3、打开液相泵，自动进样器及柱温箱电源开关；