如何辨别实验时的生物细胞是否老化

常有用户提到细胞状态不好，比如细胞不再透亮，内部很多细碎的小黑点，细胞形态不规则，培养液变黄.......你的细胞又不舒服了，我们建议除了考虑血清和细菌污染的问题，也不要忽视细胞老化的问题

细胞老化有哪些表现？

1.细胞老化最开始的现象通常为细胞内部会出现空泡（可能是凋亡小体），也可能会出现黑点，大多沿细胞周边排布，内部中间也可能会显现一些，但相对周边为少。

2.老化以后的细胞会出现立体感慢慢消失，开始成扁平状，细胞与细胞之间的间隔减小或混在一起，细胞不再是梭形，而会成为各种不规则形状。

3.细胞折光性变差，镜下可见细胞“变薄”，做转染实验时，细胞死亡率会较高。但培养液不会发生迅速变黄的现象，仍清亮。（但如果是细菌污染的话，一般会出现培养液的迅速变黄，混浊，镜下可见大量繁殖的细菌；若是支原体污染的话，细胞也会失去正常形态，会有细胞的死亡）。

4.细胞的贴壁性减弱，开始有细胞漂浮于培养液中。

5.老化的细胞，表面分泌物会增多，细胞表面的纯净度越来越低。

6.分裂的细胞数量明显的减少同时细胞的增殖速度也会大大下降。

7.细胞开始长角分化。

图1 实心箭头指示的是发生细胞老化的HEK293细胞，SA-β-gal染色阳性，而空心箭头指的是未发生老化的细胞。图2 被染上蓝色的是发生老化的MSC细胞, 未被染色的是未发生老化的细胞

由图片可以看出老化细胞体积增大、细胞扁平。

细胞老化，可能有这些原因？

1.在体外传代次数太多或太久2.培养液营养不够3.接种密度不当4.培养液pH偏离

如何预防细胞老化？

1、防止细胞老化最主要还是要做到勤观察、勤换液、勤传代、勤保种，特别是传代，不能等细胞太密了之后传，一般细胞建议长到70％融合度传代最好。

2、换培养液应该根据自己细胞消耗培养基的情况来确定是否该换。如果感觉时间不好把握的话就多培养几瓶细胞，在不同的时间换液，最后再来比较下，看什么时候换液好，得出自己的结论。

3、选择正确的血清与培养基：细胞对血清特别敏感，直接影响细胞的生长。一定要选择适合的血清不然就会因营养物质不协调而导致细胞老化。
4、在间充质干细胞培养时必然要进行消化，但是消化对细胞的表面蛋白质有很强的破坏作用，因此不能长时间进行消化并且在选择消化酶时也要选择较为合适pH和浓度，不然就会使细胞老化或者分化。

5、在开始养细胞传代时，也要特别注意冻存细胞，以保持细胞有种子存在，可以有效避免细胞损伤。

6、此外，老化后的细胞很难再重新年轻化，重新复苏吧！

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